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基因工程药物的研究与开发

发布日期:2011-10-11 

1 人工合成基因
    目前基因上程合成刃—100个碱基长度的寡核苦酸并不困难,然历连接到表达载体上,表达一个不太长的蛋白分子,如人牛长激素释放抑制因子只有14个氨基酸,而且基因序列明确,故采用人上合成基因后进行表达是容易办到的。当然对于大分子蛋白,人工合成则受到限制,难度较大,近年来南京大学已合成了肿瘤坏死出于基因片段,并进行了表达,已成为国家]类新药。

2.  利用cdna文库
    旨先从细胞内b4日应基因转录删a,将提取的dwa经逆转录酶作用和特殊加工处理,筛选出所需基因片段cdna,例如要得到含干扰素(im—。)的dna,通常是从病毒(ndv—f)刺激诱导的淋巴细胞中提取删,将纯品ipn—mrna在逆转录酶作用下获得抓—cdna.并将该cdna插入质粒,在细菌中克降,通过非洲瞻炼卵或网织红细胞的翻译来确定是否带有该重要基因序列,也可采用其他方法,如通过pcr扩增c用已合成的引物进行克隆,然后将这些基因序列插入能在细菌中产生大量蛋自(高效表达)的载体中。

 3.从基因组dna文库中分离基因
    首先要亩该蛋白的相关基因cdna标记探针,然后通过分子杂交,筛选分离基因,也可以应用来自动物的向源基因的标记探针从人的dna文库中分离出入的基阅(因不同种族的基因往往存在dnaa匝序的保守区),一旦从基因文库小分离到基因,便可插入载体,通过相应的真核宿主系统进行表达(如酵母茵、cho细胞、昆虫细胞)。
 
4.基因的改造
  近年来人们采用基因工程新技术,创造了按照人们设计需要的自然界中没有的新型基因,并表达自然界不存在的新的蛋臼质。其方法有两种:
  
5.采用点突变技术:如将irn的cnna中某个或几个氨系酸编码子采用点突变技术使之人为地发生改变,而使抓中原来的氨基酸突变后被表达的新氨基酸所取代,从而产生新型干扰素,称为dns“类似物”(m咖四旧)。就新的dn—p来说,在141依出’rv(色氨酸)替代丫cys(半腕氨酸)或ifn—p第17位的半腕氨酸编码子m坐成acf而被丝氨酸所取代,进而产生了侧—9mri 7,不仅使抗病毒活性发生了明显改变,而量其稳定性也有很大变化。肿瘤坏死因子(1nf)原型意性太大,难以用于人体肿瘤治疗.采用点突变后的inf衍生物仍保留原有的杀肿瘤生物学特性,促毒性大大降低。我国己研究成功,并正在作为i类新药应用于临床。人白细胞介素—2(比—2)不稳定,难以运输和长期保存,采用点突变后获褐了耐热的几—2突变体,解决了l—2的稳定性问题g

 


最后更新:2011-10-11